细胞培养过程中遇到的常见问题及解决的办法

发布日期： 2022-09-23

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　　细胞培养过程中遇到的常见问题及解决的办法：

　　1、培养液pH值变化太快：

　　（1）CO2张力不对;培养瓶盖拧得太紧;NaHCO3缓冲系统缓冲力不足；培养液中盐浓度不正确。细菌、酵母或真菌污染。按培养液中NaHCO3浓度增加或减少培养箱内CO2浓度，2.0g/L到3.7g/L浓度NaHCO3对应CO2浓度为5％到10％。

　　（2）改用不依赖CO2培养液。松开瓶盖1/4圈。加HEPES缓冲液至10到25mM终浓度。在CO2培养环境中改用基于Earle’s盐配制的培养液，在大气培养环境中培养改用Hank’s盐配制的培养液。丢弃培养物或用抗生素除菌。

　　2、培养液出现沉淀，但pH值不变：

　　用洗涤剂清洗后残留磷酸盐将培养基成分沉淀下来。冰冻保存培养液。用去离子水反复冲洗玻璃器皿，然后除菌。将培养液加热到37℃，摇动使其溶解如沉淀仍然存在，丢弃培养液。

　　3、细胞培养液出现沉淀，同时pH发生变化：

　　细菌或真菌污染//丢弃培养物或用抗生素除菌。

　　4、培养细胞不贴壁：

　　胰蛋白酶消化过度；支原体污染；培养液中无贴壁因子。缩短胰蛋白酶消化时间或降低胰蛋白酶浓度。分离培养物，检测支原体。清洁支架和培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物。

　　5、悬浮细胞成簇：

　　细胞培养液中含钙、镁离子。支原体污染。蛋白酶过度消化使得细胞裂解释放DNA。用无钙镁平衡盐溶液洗涤细胞，轻轻吹吸细胞获得单细胞悬液。分离培养物，检测支原体。如发现支原体污染，丢弃培养物。用DNase处理细胞。

　　6、原代细胞培养物污染：

　　原代培养组织在进入培养前已污染。培养前用含高浓度抗生素的平衡盐溶液反复冲洗组织。

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