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严格使用一次性细胞培养瓶
点击次数:1444 发布时间:2018-11-25

  严格使用一次性细胞培养瓶

  一次性细胞培养瓶盖不应拧得太紧,以保证气体交换。HEPES是一种非离子缓冲液,在pH 7.2-7.4范围内具有较好的缓冲能力,但是非常昂贵,在高浓度时对一些细胞可能有毒。HEPES缓冲液可与低水平的碳酸钠(0.34g/L)共用,以抵消因额外加入HEPES引起的渗透压增加。在这种培养条件下,一次性细胞培养瓶的盖子应拧紧,以防止培养液中所需的少量碳酸盐散入空气中。大多数培养液中含有酚红作为pH指示剂,酸性培养液呈橙黄色,碱性培养液呈深红色。

  温馨提示:请严格按照此步骤操作,否则可能会出现一次性细胞培养瓶中细胞生长空白区域,即所谓的“生长空洞”。多数用户使用的不是专用的预包被一次性细胞培养瓶,而是普通的一次性细胞培养瓶或培养皿,其表面环境并不利于无血清培养环境下的间充质干细胞贴壁。37℃放置5-10分钟,可让培养基中的促贴壁物质更好地与一次性细胞培养瓶底部结合,使得间充质干细胞的贴壁能力增强,降低“生长空洞”出现的概率。

  细胞消化:将一次性细胞培养瓶竖立放置,吸走培养基,如果培养基中的脱落细胞较多,说明细胞现在很容易脱落,只要加入1ml的PBS+EDTA(0.02%),来回轻微晃动培养瓶直到细胞完全脱落,加入10mlMEM(10%杭州四季青胎牛血清),混匀,不能吹打,分装2瓶,如果细胞没长满就脱落,则只需加入5mlMEM,不分装。如果培养瓶中的细胞贴壁较牢固,培养基上清没有细胞脱落碎片,且细胞长满达到80%以上,吸走培养基,加入5ml的PBS+EDTA(0.02%),迅速轻微晃动,竖立培养瓶,吸走,加入1ml0.05%胰酶,37度消化不超过3min,细胞完全消化脱壁,取出加入10ml培养基轻微吸打混匀,分装2瓶。

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